Флоральное погружение: упрощённый метод трансформации Arabidopsis thaliana с помощью Agrobacterium

Метод вакуумной инфильтрации с использованием Agrobacterium позволил трансформировать Arabidopsis thaliana без культивирования тканей растений и их регенерации. В настоящем исследовании этот метод оценили и разработали существенно модифицированный метод трансформации. Трудоёмкий процесс вакуумной инфильтрации заменили простым погружением развивающихся цветочных органов в раствор, содержащий Agrobacterium tumefaciens, 5% сахарозы и 500 мкл/л поверхностно-активного вещества Silwet L-77. Сахароза и поверхностно-активное вещество были необходимы для успешного применения метода флорального погружения. Максимальная частота получения трансформированного потомства отмечалась у растений, инокулированных при наличии большого числа незрелых цветочных бутонов и небольшого числа стручков. Среды для культивирования тканей растений, гормон бензиламинопурин и коррекция pH не требовались; Agrobacterium можно было наносить на растения при различной плотности клеток. Повторное нанесение Agrobacterium примерно вдвое увеличивало частоту трансформации и общий выход трансформантов. Укрытие растений на 1 сутки после инокуляции для сохранения влажности также вдвое повышало частоту трансформации. С помощью этого метода можно было трансформировать несколько экотипов. Модифицированный метод должен упростить высокопроизводительную трансформацию Arabidopsis при мечении генов с помощью Т-ДНК, позиционном клонировании и попытках целенаправленной замены генов.