Очистка рекомбинантного аденоассоциированного вируса новыми методами повышает инфекционный титр и выход

Традиционные методы очистки рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), основанные на ультрацентрифугировании в градиенте хлорида цезия, часто приводили к получению векторных препаратов с непостоянными характеристиками и значительной потере инфекционной активности частиц. В этой работе представлены несколько новых методов очистки с использованием неионных градиентов йодиксанола с последующей ионообменной или гепариновой аффинной хроматографией на обычных или ВЭЖХ-колонках. Эти методы обеспечивают извлечение более 50% rAAV из исходного лизата и позволяют регулярно получать препараты с чистотой более 99%. Важнее всего, что новые процедуры стабильно обеспечивают отношение числа частиц к инфекционности менее 100 — значительно лучшее, чем при использовании традиционных методов. Новый протокол повышает общий выход инфекционного rAAV как минимум в 10 раз и позволяет полностью очистить его за один рабочий день. Некоторые из этих методов подходят и для крупномасштабного производства.