Измерение концентрации метаболитов глюкокортикоидов в фекалиях сельскохозяйственных животных

После инфузии меченного ¹⁴C кортизола пони и свиньям собирали образцы фекалий. При экстракции 0,5 г фекалий 5 мл 80–90%-го метанола наибольшую радиоактивность обнаруживали в надосадочной жидкости. Большая часть метаболитов была растворима в эфире. После высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) наличие иммунореактивных метаболитов устанавливали, исследуя каждую фракцию ВЭЖХ с помощью иммуноферментных анализов на кортизол, кортикостерон и 11-оксоэтиохоланолон. Пики, совпадавшие по времени элюирования с радиоактивностью, выявлялись только при анализе на 11-оксоэтиохоланолон. Для биологической валидации метода обоим видам животных (n = 6) последовательно вводили внутривенно адренокортикотропный гормон (АКТГ) и дексаметазон. Определяли концентрацию кортизола в крови и содержание в фекалиях веществ, иммунореактивных по отношению к 11-оксоэтиохоланолону. У лошадей базальная концентрация составляла 2,3–35,2 нмоль/кг. Примерно через сутки после введения АКТГ содержание этих метаболитов повышалось более чем на 200% относительно исходного уровня. После введения дексаметазона концентрация снижалась и достигала минимума через 2 дня. У свиней повышение содержания этих метаболитов после введения АКТГ наблюдалось лишь у трёх животных; дексаметазон не вызывал снижения концентрации. Стабильность образцов после дефекации оценивали, храня фекалии коров, лошадей и свиней при комнатной температуре. При хранении концентрация измеряемых метаболитов кортизола в фекалиях коров, лошадей и свиней значимо повышалась через 1, 4 и 24 часа соответственно. В замороженных образцах этот эффект ослабевал после оттаивания при 40 °C; оттаивание при 95 °C предотвращало повышение содержания иммунореактивных веществ.