Plat-E: эффективная и стабильная система для временной упаковки ретровирусов

На основе клеточной линии 293T создана высокоэффективная линия для упаковки ретровирусов Platinum-E (Plat-E). По эффективности, стабильности и безопасности Plat-E превосходит существующие линии для упаковки. Новые упаковочные конструкции, использованные при создании Plat-E, обеспечивают высокую и стабильную экспрессию структурных белков вируса. В традиционных упаковочных конструкциях для экспрессии структурных генов ретровируса gag-pol и env использовали промотор MuLV-LTR. В наших конструкциях применялся промотор EF1α, который в клетках 293T в 100 раз активнее промотора MuLV-LTR; в сочетании с консенсусной последовательностью Козака перед стартовым кодоном он обеспечивает высокую экспрессию структурных белков вируса в клетках Plat-E. Чтобы поддерживать высокий титр ретровирусов при селекции с помощью препаратов, в упаковочные конструкции между геном, кодирующим gag-pol или env, и геном селективного маркера была встроена последовательность IRES (внутренний сайт входа рибосомы). Клетки Plat-E способны стабильно продуцировать ретровирусы со средним титром 1 × 10⁷/мл не менее 4 месяцев. Кроме того, поскольку в упаковочные конструкции включены только кодирующие последовательности структурных генов вируса, без избыточных последовательностей ретровируса, вероятность образования репликационно-компетентных ретровирусов вследствие рекомбинации практически исключена.