Хитозановые микрочастицы для пероральной вакцинации: получение, характеристика и предварительное исследование захвата пейеровыми бляшками мышей in vivo

Несмотря на многочисленные преимущества пероральной вакцинации перед парентеральным введением, её разработку по-прежнему затрудняют разрушение вакцины в кишечнике и низкое проникновение в лимфоидную ткань желудочно-кишечного тракта. В этом исследовании были получены и охарактеризованы хитозановые микрочастицы: определены их размер, дзета-потенциал, морфология, загрузка овальбумином и его высвобождение. Кроме того, с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM) изучали поглощение хитозановых микрочастиц пейеровыми бляшками мышей in vivo. Микрочастицы получали методом осаждения/коацервации; метод оказался воспроизводимым при использовании разных серий хитозана. Размер микрочастиц составлял 4,3 ± 0,7 мкм, а дзета-потенциал — +20 ± 1 мВ. Поскольку М-клетки пейеровых бляшек могут поглощать только микрочастицы размером менее 10 мкм, эти частицы пригодны для создания систем доставки вакцин. При визуализации методом CLSM было показано, что модельный антиген овальбумин заключён внутри хитозановых микрочастиц, а не просто связан с их поверхностью. Эти результаты подтвердили с помощью сканирующей электронной микроскопии с полевой эмиссией, выявившей пористую структуру микрочастиц, способствующую включению овальбумина. Загрузка микрочастиц модельным соединением овальбумином составила около 40%. При последующем исследовании высвобождения за 4 ч выделялось лишь очень небольшое количество овальбумина, а основная его часть (около 90%) оставалась внутри микрочастиц. Поскольку полученные хитозановые микрочастицы биоразлагаемы, заключённый в них овальбумин высвободится после внутриклеточного расщепления в пейеровых бляшках. Первоначальные исследования in vivo показали, что эпителий пейеровых бляшек мышей поглощает флуоресцентно меченные хитозановые микрочастицы. Поскольку поглощение пейеровыми бляшками — необходимый этап пероральной вакцинации, полученные результаты указывают на перспективность разработанных пористых хитозановых микрочастиц как системы доставки вакцин.