Явление тушения флуоресценции вследствие фотоиндуцированного переноса электронов между флуоресцентным красителем и азотистым основанием нуклеотида

Флуоресцентно меченные олигонуклеотидные зонды широко применяются в биотехнологии; при этом было показано, что взаимодействие красителей с азотистыми основаниями вызывает тушение флуоресценции. Это явление создаёт серьёзные проблемы для аналитических методов, но может быть полезным в ряде других случаев. Поэтому необходимо оценивать интенсивность тушения флуоресценции в различных условиях. Мы сосредоточились на окислительно-восстановительных свойствах некоторых коммерчески доступных флуоресцентных красителей и исследовали взаимодействие красителя с нуклеотидом в водном растворе с помощью электрохимических и спектроскопических методов. Полученные результаты показали, что тушение сопровождается фотоиндуцированным переносом электронов между возбуждённым красителем, для которого тушение термодинамически возможно, и определённым азотистым основанием. Были получены несколько вариантов олигонуклеотида C10T6 с флуоресцентными красителями, присоединёнными к 5'-концу, после чего сравнили степень тушения при гибридизации с комплементарным олигонуклеотидом A6G10. Тушение было полностью обратимым, а его эффективность зависела от типа присоединённого флуорофора. При гибридизации флуоресценция зондов с 5-FAM, BODIPY FL или TAMRA значительно снижалась.