Тканевое распределение экспрессии мРНК изоформ цитохрома P450 человека, оценённое методом высокочувствительной количественной ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени

Для каждой изоформы цитохрома P450 человека были разработаны пары специфичных прямых и обратных праймеров, а также зонды TaqMan. Уровень мРНК каждой изоформы CYP в тотальной РНК, выделенной из объединённых образцов различных органов человека, определяли методом количественной ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени на приборе ABI PRISM 7700. В печени плода уровень мРНК CYP3A4 был сопоставим с уровнем мРНК CYP3A7, а уровень мРНК CYP3A4 в печени плода был примерно в 0,1 раза ниже, чем в печени взрослого человека. В печени наиболее высокий уровень экспрессии мРНК выявлен для CYP2E1. С помощью этого метода удалось выявить экспрессию мРНК 30 изоформ CYP в печени (CYP1A1, 1A2, 1B1, 2A6, 2A7, 2B6, 2C8, 2C9, 2C18, 2C19, 2D6, 2E1, 2J2, 3A4, 3A5, 3A7, 4A11, 4F2, 4F3, 5A1, 7B1, 8A1, 8B1, 17, 26A1, 27, 27B1, 39A1, 46 и 51). Наиболее высокие уровни мРНК CYP2F1 и CYP4B1 выявлены в лёгких, CYP4F8 — в предстательной железе, изоформ CYP11 (11A, 11B1 и 11B2) — в надпочечниках, CYP19 — в плаценте, а CYP24 — в почках; при этом экспрессию мРНК этих восьми изоформ CYP в печени данным методом обнаружить не удалось. Уровни мРНК изоформ CYP, определённые в различных тканях человека, хорошо соответствовали ранее опубликованным данным. Описанный метод отличается высокой специфичностью и точной количественной оценкой в широком диапазоне концентраций мРНК, что делает его пригодным для исследования большого числа образцов при оценке профиля экспрессии ферментов метаболизма лекарственных препаратов.