Мультиплексная ОТ-ПЦР для выявления четырёх переносимых тлями вирусов земляники (Fragaria spp.) с внутренним контролем на основе мРНК растения

Основные переносимые тлями вирусы земляники (Fragaria spp.) — вирус морщинистости земляники (SCV), вирус слабого пожелтения краёв земляники (SMYEV), вирус крапчатости земляники (SMoV) и вирус полосатости жилок земляники (SVBV) — могут приводить к значительным потерям урожая. В статье описан метод мультиплексной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), позволяющий одновременно выявлять все четыре вируса с использованием внутреннего контроля, специфичного к мРНК растения. Этот контроль служит показателем эффективности выделения РНК и ОТ-ПЦР. Методом исследовали 18 естественно заражённых образцов земляники. Удавалось выявить любые сочетания вирусов; все четыре вируса одновременно были обнаружены в трёх образцах, собранных с дикорастущей земляники (Fragaria chiloensis (L.) Duch.) в Чили. Предельное разведение экстракта, при котором выявлялись все четыре вируса, составляло 1:200. Праймеры внутреннего контроля, специфичные к РНК, дали ПЦР-фрагмент ожидаемого размера у 25 из 27 исследованных видов растений. Благодаря широкой применимости этих праймеров и усовершенствованным методам выделения описанный подход может стать стандартом для сопоставимого анализа методом ОТ-ПЦР у различных видов растений.