Оценка зонда 2′,7′-дихлорфлуоресцина как показателя образования активных форм кислорода и окислительного стресса

В водных средах изучали применение дихлорфлуоресцина (DCFH) для оценки содержания активных форм кислорода. Пероксид водорода окислял DCFH до флуоресцентного дихлорфлуоресцеина (DCF); добавление двухвалентного железа усиливало это окисление. Образование DCF под действием пероксида водорода в присутствии двухвалентного железа полностью подавлялось дефероксамином и частично — этилендиаминтетрауксусной кислотой, но усиливалось при добавлении диэтилентриаминпентауксусной кислоты. Окисление DCFH системой «железо—пероксид» частично подавлялось каталазой, но не пероксидазой хрена. Окисление DCFH системой «железо—пероксид» без хелатора частично подавлялось несколькими поглотителями гидроксильных радикалов, однако степень подавления не зависела от концентрации поглотителя. Это позволяет предположить, что свободные гидроксильные радикалы в данной системе не участвуют в окислении DCFH. Супероксид-анион не окислял DCFH непосредственно. Полученные данные свидетельствуют о том, что за неферментативное окисление DCFH отвечает преимущественно окислитель, образующийся из пероксида водорода и Fe²⁺. Кроме того, DCFH окисляют сама пероксидаза и окислители, образующиеся при восстановлении пероксида водорода пероксидазой. Поскольку окисление DCFH может быть обусловлено несколькими реакционноспособными промежуточными соединениями, при интерпретации данных о конкретных активных формах кислорода в биологических системах необходима осторожность. Тем не менее DCFH остаётся перспективным зондом для общей оценки окислительного стресса при токсикологических воздействиях.