Выявление программируемой клеточной гибели непосредственно в ткани с помощью специфического мечения фрагментов ядерной ДНК

Программируемая клеточная гибель (ПКГ) играет ключевую роль в развитии организма и поддержании гомеостаза в постоянно обновляющихся тканях. В настоящее время о её наличии судят преимущественно по результатам гель-электрофореза суммарного экстракта ДНК, поскольку было показано, что ПКГ сопровождается фрагментацией ДНК. На основании этого наблюдения мы разработали метод визуализации ПКГ непосредственно в ткани на уровне отдельных клеток с сохранением её архитектуры. В обычных гистологических срезах, предварительно обработанных протеазой, концы разрывов ДНК метили биотинилированным поли-dU, который присоединяли с помощью терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы, а затем окрашивали пероксидазой, конъюгированной с авидином. Реакция специфична: окрашивались только ядра в участках, где ожидается ПКГ. Первичный скрининг включал тонкую и толстую кишку, эпидермис, лимфоидные ткани, яичник и другие органы. Подробный анализ показал, что процесс начинается на периферии ядра, протекает относительно быстро (от начала до гибели клетки проходит 1–3 ч), а ПКГ возникает в тканях очагами. Объём тканевой ПКГ, выявляемый этим методом, значительно превышает объём апоптоза, обнаруживаемого по морфологии ядер; таким образом, метод открывает возможности для широкого спектра исследований.