Очистка тубулина из мозга двумя циклами полимеризации и деполимеризации в буфере высокой молярности

Микротрубочки можно собирать in vitro из очищенных гетеродимеров α/β-тубулина в присутствии ГТФ. Тубулин обычно получают из ткани мозга животных посредством многократных циклов полимеризации–деполимеризации с последующей ионообменной хроматографией для удаления загрязняющих белков, ассоциированных с микротрубочками, и моторных белков. Мы показали, что всего два цикла полимеризации–деполимеризации тубулина из мозга свиньи в присутствии буфера PIPES высокой молярности обеспечивают эффективное удаление загрязняющих белков и получение концентрированного раствора тубулина. Предложенный протокол быстрее традиционных процедур на основе ионообменной хроматографии и позволяет получать более активный тубулин.