Конструирование и характеристика амплифицируемых многокопийных векторов для клонирования ДНК, полученных на основе криптического миниплазмида P15A

Описано создание и характеристика класса многокопийных плазмидных векторов для клонирования, содержащих систему репликации миниплазмида P15A. В сконструированных плазмидах в генах устойчивости к антибиотикам были предусмотрены сайты расщепления для ряда широко используемых сайт-специфических эндонуклеаз, что позволяло удобно применять метод вставочной инактивации для отбора клонов, содержащих гибридные молекулы ДНК. Хотя эти плазмиды имели гомологию последовательности ДНК с плазмидой ColE1 в области репликации, амплифицировались под действием хлорамфеникола или спектиномицина, требовали для репликации ДНК-полимеразу I и разделяли с ColE1 другие свойства репликации, они тем не менее были совместимы с ColE1. Плазмиды, производные P15A, не передавались сами по себе и плохо мобилизовались штаммами Hfr; однако наличие в той же клетке плазмиды ColE1 восстанавливало мобилизацию.