Амплификация последовательности гена invA Salmonella typhimurium методом полимеразной цепной реакции для специфического выявления сальмонелл

Амплификацию нуклеотидных последовательностей гена invA Salmonella typhimurium оценивали как метод выявления сальмонелл. Исследовали 630 штаммов Salmonella, относящихся более чем к 100 сероварам, включая 20 наиболее распространённых сероваров, выделенных от животных и человека в Канаде. Контрольную группу составили 142 штамма бактерий, не относящихся к Salmonella и принадлежащих к 21 роду. Для скрининга культур отдельную бактериальную колонию непосредственно вносили в реакционную смесь для полимеразной цепной реакции (ПЦР), содержащую пару праймеров, специфичных к гену invA. Специфичный продукт ПЦР представлял собой фрагмент ДНК длиной 284 п. н., который визуализировали в 2%-ном агарозном геле. Были выявлены все штаммы Salmonella, кроме двух штаммов S. litchfield и двух штаммов S. senftenberg. Ни один штамм, не относящийся к Salmonella, не давал специфичного продукта амплификации. При неспецифической амплификации у нескольких таких штаммов образовывался продукт, размер которого заметно отличался от размера специфичного фрагмента длиной 284 п. н. Специфичность амплификации дополнительно подтвердили гибридизацией: меченный 32P фрагмент гена invA гибридизовался только со специфичным продуктом длиной 284 п. н. Выявление 99,4% исследованных штаммов Salmonella и отсутствие специфичной амплификации ДНК штаммов других бактерий подтверждают, что ген invA содержит уникальные для Salmonella последовательности и подходит в качестве мишени для ПЦР с потенциальным применением в диагностике.