Эффективный отбор трансфектантов с высокой экспрессией с использованием нового эукариотического вектора

Разработан новый экспрессионный вектор, позволяющий эффективно отбирать трансфектанты, экспрессирующие чужеродные гены на высоком уровне. Вектор включает повсеместно активный сильный промотор на основе промотора β-актина, субрегион генома вируса папилломы крупного рогатого скота размером 69% и мутантный ген, кодирующий неомицинфосфотрансферазу II, под контролем слабого промотора; последний обеспечивает лишь минимальную устойчивость к G418. Поэтому высокие концентрации G418 (около 800 мкг/мл) эффективно отбирают трансфектанты с высоким числом копий вектора (более 300). Систему испытали при продукции интерлейкина-2 человека в клетках L и клетках яичника китайского хомяка (CHO). Высокие концентрации G418 эффективно обеспечивали получение трансфектантов клеток L и CHO, стабильно продуцирующих интерлейкин-2 на уровнях, сопоставимых с ранее достигнутыми с помощью амплификации генов. Было установлено, что последовательности вектора интегрировались в хромосомы клеток-хозяев и стабильно сохранялись в трансфектантах в течение нескольких месяцев.