Равномерно меченные тритием пептиды и их биодеградация in vivo и in vitro

Биологически активные пептиды, равномерно меченные тритием, использовали для изучения их биодеградации in vitro и in vivo. Пептиды с удельной радиоактивностью 50–150 Ci/mmol получали методом высокотемпературного твердофазного каталитического изотопного обмена (HSCIE) с использованием поверхностно-мигрирующего трития. Распределение изотопной метки по всем аминокислотным остаткам пептида позволяет одновременно определять практически все возможные продукты его ферментативного гидролиза. Разработанный аналитический метод включает экстракцию меченных тритием пептидов из тканей организма и хроматографическое выделение отдельных меченных пептидов из смеси продуктов распада. Концентрации исследуемого пептида и продуктов его биодеградации рассчитывали по результатам жидкостного сцинтилляционного счёта. С помощью этого метода изучали пути биодеградации гептапептида TKPRPGP (Селанк) и трипептида PGP в плазме крови. Фармакокинетику Селанка, пептида с анксиолитическим действием, также исследовали в тканях головного мозга после его интраназального введения in vivo. Определяли концентрации меченных пептидов; основными продуктами биодеградации Селанка оказались пентапептид TKPRP, трипептид TKP и дипептиды RP и GP. При изучении биодеградации гептапептида MEHFPGP (Семакс) в присутствии нервных клеток основными продуктами распада были пентапептид HFPGP и трипептид PGP. Активность энкефалиназ плазмы крови исследовали с использованием равномерно меченного тритием [Leu]энкефалина. Показано, что выраженное ингибирующее действие Семакса на энкефалиназы плазмы крови обусловлено его влиянием на аминопептидазы. Метод с использованием равномерно меченных тритием пептидов позволяет определять концентрации пептидов и активность участвующих в их распаде ферментов в биологических образцах на уровне пикограмм как in vitro, так и in vivo.