Клонирование, экспрессия и характеристика аллергена пыльцы полыни Art v 2 — белка, связанного с патогенезом, семейства PR-1

Полынь обыкновенная (Artemisia vulgaris) относится к семейству сложноцветных и является одной из основных причин аллергии в конце лета и осенью. Цель исследования — охарактеризовать аллерген Art v 2 из пыльцы полыни. Кожные прик-тесты у 19 пациентов с аллергией на полынь и 10 контрольных пациентов выявили сенсибилизацию к Art v 2 у 58% пациентов; ложноположительных результатов в контрольной группе не было. Art v 2 выделили с помощью стандартной хроматографии и хроматографии на колонке с конканавалином A. Кажущаяся молекулярная масса аллергена составляла 33 кДа при гель-проникающей хроматографии и 20 кДа при денатурирующем электрофорезе в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия, что указывает на наличие двух одинаковых субъединиц. Кодирующую Art v 2 кДНК амплифицировали методом ПЦР с использованием вырожденных праймеров, разработанных на основе опубликованных частичных аминокислотных последовательностей. Клонированная кДНК Art v 2 содержит 140 п. н., кодирующих полипептид с молекулярной массой 15,8 кДа, расчётным значением pI 5,2 и одним потенциальным участком N-гликозилирования. По результатам поиска гомологов белок Art v 2 имеет 42–55% идентичных аминокислотных остатков с белками PR-1 томата, картофеля, рапса, пшеницы и риса. Также обнаружена гомология с Ves v 5 (41% идентичных остатков). Рекомбинантный Art v 2, экспрессированный в бактериях, распознавался лишь у 21% пациентов с аллергией на полынь. Таким образом, Art v 2 — первый аллерген пыльцы сорных растений, относящийся к белкам PR-1; его рекомбинантная форма может быть полезна для молекулярной диагностики аллергии, связанной с полынью.