Быстрый и эффективный метод выделения РНК из различных тканей виноградной лозы и других древесных растений

Введение: Качество и целостность РНК имеют критическое значение для многих исследований в области молекулярной биологии растений. Выделение высококачественной РНК из виноградной лозы и других древесных растений затруднено из-за присутствия полисахаридов, полифенолов и других соединений, связывающихся с РНК или соосаждающихся с ней.

Цель: Разработать оптимизированный протокол на основе цетилтриметиламмония бромида (ЦТАБ), позволяющий сократить время и стоимость выделения без снижения качества и выхода РНК из тканей нескольких растений, богатых полисахаридами.

Методы: В исходный протокол на основе ЦТАБ внесли несколько изменений. Все этапы центрифугирования проводили при 4 °C, уменьшили массу образца и повысили концентрации PVP-40 и LiCl, сократив время инкубации перед осаждением РНК. Этот быстрый протокол на основе ЦТАБ сравнили с шестью различными методами выделения РНК на трёх типах тканей виноградной лозы: растениях, выращенных in vitro, листьях и зрелых побегах полевых растений в период активного роста.

Результаты: Быстрый метод на основе ЦТАБ позволял получать высококачественную РНК всего за 3 ч при низкой стоимости; его эффективность была не ниже, а в ряде случаев выше, чем у других, более трудоёмких и дорогих протоколов. Метод применили для выделения РНК из других тканей виноградной лозы и других древесных видов, включая оливу, лимон, тополь, каштан, яблоню, грушу, персик, вишню, абрикос, сливу и киви. Высококачественную РНК удалось выделить из всех исследованных тканей и видов растений.

Выводы: Оптимизация протокола на основе ЦТАБ позволяет быстро выделять высококачественную РНК из виноградной лозы и многих древесных растений.