Иммунное распознавание новых изоформ и доменов основного аллергена пыльцы полыни Art v 1

Изоформы аллергенов могут различаться по характеру распознавания IgE и Т-клетками, что может влиять на выбор молекул-кандидатов для диагностики и терапии. Целью исследования было выявить и охарактеризовать изоформы Art v 1 — основного аллергена пыльцы полыни. Кроме того, отдельные домены Art v 1 исследовали с физико-химической и иммунологической точек зрения. Для этого кДНК Art v 1 радиоактивно метили и использовали для скрининга библиотеки кДНК пыльцы полыни. Положительные клоны секвенировали и использовали для получения рекомбинантных белков в Escherichia coli с помощью вектора pHIS-Parallel2. Белки очищали с помощью аффинной и ионообменной хроматографии. Связывание антител с рекомбинантными белками оценивали методом иммуноблоттинга, методом ИФА, в экспериментах по перекрёстному ингибированию и тестах на высвобождение медиаторов. Были выявлены 7 изоформ Art v 1, различавшихся по 1–6 аминокислотным остаткам. Примечательно, что все аминокислотные различия затрагивали пролиновый домен, несущий посттрансляционные модификации молекулы. Значимых различий в реактивности IgG или IgE между изоформами Art v 1 и полученным в E. coli доменом дефензина не выявлено. При экспрессии в E. coli пролиновый домен не распознавался антителами, специфичными к Art v 1. Результаты показали, что значимые эпитопы Art v 1, распознаваемые IgE, расположены в домене дефензина, и позволяют предположить, что углеводы участвуют в аллергенности природного Art v 1. Системы экспрессии на основе растений могут помочь выявить возможные различия в характере гликозилирования изоформ Art v 1 и их способности связывать IgE. Эти результаты имеют непосредственное значение для разработки новых методов диагностики и терапии аллергии на пыльцу полыни.