pEAQ: универсальные векторы экспрессии для быстрой и простой транзиентной экспрессии гетерологичных белков в растениях

Агроинфильтрация листовой ткани бинарными векторами, несущими последовательность интересующего гена, представляет собой быстрый метод экспрессии белков в растениях. Недавно было показано, что включение последовательности, подлежащей экспрессии, между модифицированной 5'-нетранслируемой областью (UTR) и 3'-UTR вируса мозаики вигны (CPMV) РНК-2 (CPMV-HT) в составе бинарного вектора pBINPLUS значительно повышает уровень экспрессии [Sainsbury, F. и Lomonossoff, G.P. (2008) Plant Physiol. 148, 1212-1218]. Для использования этого результата был создан ряд небольших бинарных векторов, предназначенных для транзиентной экспрессии (обозначенных как векторы pEAQ). В них из остова pBINPLUS и области T-ДНК удалено более 7 т.п.о. нефункциональной последовательности, а также введены уникальные сайты рестрикции, позволяющие размещать на одной плазмиде несколько экспрессионных кассет, включая кассету для супрессора сайленсинга. Эти векторы позволяют в течение нескольких дней одновременно достигать высокого уровня экспрессии нескольких полипептидов из одной плазмиды. Кроме того, были разработаны векторы, позволяющие напрямую клонировать гены в бинарную плазмиду как с использованием рестрикционных эндонуклеаз, так и методом рекомбинации GATEWAY. В обоих случаях при необходимости к целевой последовательности можно присоединять гистидиновую метку на N- или C-конце. Эти векторы представляют собой простой и быстрый инструмент для получения миллиграммовых количеств рекомбинантных белков из растений с использованием стандартных методов растительных исследований в лабораторном масштабе.