Необходимые условия для измерения цитокинов в клинических исследованиях с применением мультиплексных иммуноанализов

Введение: Расширение знаний о взаимодействии клеток иммунной системы, включая центральную роль цитокиновых сетей, привело к разработке новых методов лечения с использованием моноклональных антител, блокирующих определённые компоненты иммунной системы. Системные концентрации цитокинов могут служить суррогатными конечными точками эффективности таких вмешательств и использоваться для изучения воспалительных путей, активных у пациентов in vivo. Это стало возможным благодаря новым технологиям, таким как мультиплексные иммуноанализы, позволяющие определять несколько цитокинов в одном образце. Однако, казалось бы, незначительные и часто недооцениваемые процессы — обработка и хранение образцов, а также влияние эндогенных белков плазмы — могут существенно влиять на надёжность и воспроизводимость определения цитокинов. Поэтому мы изучили несколько факторов, способных влиять на цитокиновый профиль, включая тип пробирок для забора крови, продолжительность хранения и количество циклов замораживания-размораживания.

Результаты: Поскольку в физиологических условиях концентрации цитокинов обычно низкие или не определяются, мы добавляли цитокины в различные образцы плазмы и сыворотки. В целом степень извлечения составляла 80–120%. При длительном хранении цитокины оставались стабильными в течение 2 лет при температуре −80 °C. Через 4 года концентрации ряда цитокинов (IL-1alpha, IL-1beta, IL-10, IL-15 и CXCL8) снижались до 75% и менее исходных значений. Кроме того, только 2 из 15 цитокинов сохраняли стабильность после нескольких циклов замораживания-размораживания. Мы также продемонстрировали возможность включения внутреннего контроля в мультиплексные иммуноанализы цитокинов.

Выводы: В совокупности полученные данные определяют параметры, имеющие ключевое значение для измерения цитокинов в клинических исследованиях.