Стволовые клетки из выпавших молочных зубов человека: выделение, длительное культивирование и фенотипический анализ

Цель: Выделить стволовые клетки из выпавших молочных зубов человека (SHED), культивировать их in vitro, изучить их основные биологические свойства и фенотип, а также сравнить полученные результаты с данными о стволовых клетках пульпы зуба (DPSC), выделенных из постоянных зубов.

Методы: Пульпу осторожно извлекали из выпавших зубов. После ферментативной диссоциации пульпы SHED культивировали в модифицированных средах для взрослых мезенхимальных клеток-предшественников, содержащих 2% фетальной сыворотки телёнка и дополненных факторами роста и добавкой ITS (инсулин, трансферрин и натрий). Жизнеспособность клеток и другие биологические свойства оценивали с помощью анализатора Vi-Cell и счётчика Z2-Counter. Анализ ДНК и фенотипирование проводили методом проточной цитометрии.

Результаты: SHED удалось культивировать более чем на протяжении 45 удвоений популяции. При культивировании в тех же условиях, что и DPSC, среднее время удвоения популяции SHED было больше (41,3 ч против 24,5 ч). При сравнении фенотипов культивированных SHED и DPSC выявлены различия в экспрессии CD29, CD44, CD71, CD117 и CD166. При длительном культивировании у SHED не наблюдалось признаков дегенерации или спонтанной дифференцировки.

Выводы: Стволовые клетки были выделены из выпавших зубов. По сравнению с DPSC скорость пролиферации SHED была примерно на 50% ниже, а их фенотип несколько отличался. Эти клетки могут быть полезны для создания банков стволовых клеток, дальнейших исследований и будущего терапевтического применения.