МТТ-тест для оценки жизнеспособности клеток: внутриклеточная локализация продукта формазана в липидных каплях

Хотя МТТ широко используют для оценки цитотоксичности и жизнеспособности клеток, точная локализация восстановленного продукта формазана до сих пор неясна. В этом исследовании локализацию формазана МТТ изучали методом прямой микроскопии живых клеток HeLa и с помощью анализа колокализации с флуоресцентными зондами, избирательно окрашивающими органеллы. Гранулы формазана МТТ не колокализовались с митохондриями, окрашенными родамином 123 или выявленными по собственной флуоресценции. Также не наблюдалось колокализации гранул формазана МТТ с лизосомами, окрашенными нейтральным красным. С учётом липофильных свойств и растворимости формазана МТТ в липидах реакцию МТТ оценивали после обработки клеток эмульсиями подсолнечного масла, вызывавшими массовое образование липидных капель. В этих условиях в липидных каплях обнаруживалось большое количество отложений формазана МТТ. Кинетическое исследование жизнеспособности клеток после обработки МТТ не выявило вредного воздействия при кратковременном воздействии. Модели количественных соотношений «структура—активность» (QSAR) использовали для прогнозирования и объяснения локализации тетразолиевой соли МТТ и продукта её восстановления — формазана. Результаты моделирования согласовывались с экспериментальными данными о накоплении формазана МТТ в липидных каплях.