Быстрый автоматизированный колориметрический тест на основе тетразолия для выявления соединений с активностью против ВИЧ

Разработан быстрый, чувствительный и автоматизированный метод для оценки активности препаратов против ВИЧ in vitro. В качестве клеточной модели использовали линию Т4-клеток MT-4, трансформированную HTLV-I и, как ранее показали Koyanagi et al. (1985), высокочувствительную к ВИЧ и пермиссивную для его репликации. Конечной точкой служило подавление цитопатического действия ВИЧ. Жизнеспособность как ВИЧ-инфицированных, так и незаражённых контрольных клеток оценивали спектрофотометрически по восстановлению 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида (MTT) непосредственно в лунках. Метод оптимизировали для эффективного использования многоканальных пипеток, систем дозирования с микропроцессорным управлением и автоматического измерения оптической плотности. Отношение оптической плотности незаражённых контрольных клеток к показателям ВИЧ-инфицированных образцов составляло около 20. Это позволяло точно определять 50%-ные эффективные дозы, что было продемонстрировано на примере 3'-азидо-2',3'-дидезокситимидина (AZT), 2',3'-дидезоксицитидина (ddCyd), декстрансульфата и гепарина. По сравнению с методом исключения трипанового синего этот подход значительно сокращал трудозатраты и позволял оценивать активность против ВИЧ большого числа соединений.