Регуляция потенциалзависимого калиевого канала Kv1.3 рекомбинантным человеческим белком Klotho

Введение и цель: Klotho — белок, преимущественно синтезируемый в почках и поступающий в кровь. Он участвует в подавлении образования 1,25(OH)2D3 и тем самым играет важную роль в регуляции минерального обмена. Кроме того, α-Klotho обладает активностью β-глюкуронидазы и регулирует стабильность ряда переносчиков и каналов плазматической мембраны, а значит, и их активность. Поэтому α-Klotho участвует в регуляции различных функций, не связанных напрямую с минеральным обменом, включая функции лимфоцитов. В настоящем исследовании изучали влияние α-Klotho на потенциалзависимый калиевый канал Kv1.3.

Методы: В ооциты Xenopus вводили cRNA, кодирующую Kv1.3 (KCNA3), и методом двухэлектродной фиксации потенциала регистрировали вызванный деполяризацией выходящий ток. Исследования проводили без предварительной обработки или после 24-часовой обработки рекомбинантным человеческим белком Klotho (50 нг/мл), в отсутствие или присутствии ингибитора β-глюкуронидазы D-saccharic acid-1,4-lactone (DSAL, 10 мкМ). Кроме того, после 24-часовой инкубации без белка Klotho или с ним (50 нг/мл) калиевый ток в клетках лимфомы Jcam регистрировали методом пэтч-клампа в конфигурации «целая клетка». Содержание белка Kv1.3 в клетках Jcam определяли методом проточной цитометрии с использованием флуоресцентных антител.

Результаты: В ооцитах Xenopus, экспрессирующих Kv1.3, после обработки рекомбинантным человеческим белком Klotho (50 нг/мл, 24 часа) значительно увеличивались токи через Kv1.3 и содержание белка Kv1.3; добавление DSAL устраняло этот эффект. В клетках Jcam обработка рекомбинантным человеческим белком Klotho также повышала калиевый ток и содержание белка Kv1.3.

Выводы: Белок α-Klotho увеличивает содержание каналов Kv1.3 в плазматической мембране и ток через них; этот эффект зависит от β-глюкуронидазной активности белка.