Быстрое и чувствительное выявление точечных мутаций и полиморфизмов ДНК с помощью полимеразной цепной реакции

Предложен быстрый и чувствительный метод выявления изменений оснований в заданных последовательностях геномной ДНК. Метод основан на том, что специфические участки геномных последовательностей можно одновременно эффективно метить и амплифицировать с использованием меченых субстратов в полимеразной цепной реакции, а в неденатурирующих полиакриламидных гелях электрофоретическая подвижность одноцепочечной нуклеиновой кислоты зависит не только от её размера, но и от последовательности. Метод не требует расщепления рестриктазами, переноса на мембрану или гибридизации с зондами. Было установлено, что большинство однонуклеотидных замен во фрагментах длиной до 200 оснований можно выявить по изменению электрофоретической подвижности. С помощью этого метода выявлена активация онкогена RAS. Кроме того, показано, что рассеянные повторяющиеся последовательности человека — повторы Alu — обладают выраженным полиморфизмом.