Очистка культуральной среды диализом для размножения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека в суспензионной культуре

Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека (иПСК) секретируют необходимые им аутоκринные факторы, которые удаляются вместе с токсичными метаболитами при ежедневной смене культуральной среды. В этом исследовании сначала определили минимальную ингибирующую концентрацию молочной кислоты для иПСК, а затем создали систему очистки среды, позволяющую удалять из использованной среды токсичные метаболиты и возвращать в неё аутоκринные и другие факторы роста. После диализа в очищенной среде сохранялось около 87% основного фактора роста фибробластов и 80% трансформирующего фактора роста β1. Такая среда эффективно усиливала пролиферацию иПСК в адгезионной культуре. При использовании системы для обновления среды в суспензионной культуре на 4-е сутки плотность клеток достигала (1,1 ± 0,1) × 10⁶ клеток/мл; экспрессия OCT 3/4 составляла 99,5 ± 0,2%, а TRA-1-60 — 78,3 ± 1,1%. Эти показатели экспрессии были сопоставимы с показателями в обычной суспензионной культуре. Таким образом, диализная очистка культуральной среды позволяет удалять токсичные метаболиты, возвращать в среду аутоκринные и другие факторы роста и снижать расход макромолекул при размножении иПСК в суспензионной культуре.