Валидация иммуноферментного набора Neogen для определения бензодиазепинов с использованием клоназепама в качестве целевой молекулы в крови и моче

В исследовании продемонстрирована валидация полуколичественного метода быстрого скрининга образцов цельной крови и мочи с использованием клоназепама в качестве целевой молекулы для набора Neogen® Benzodiazepine. Пороговые концентрации были валидированы на уровнях 10,0 нг/мл для цельной крови и 25,0 нг/мл для мочи. Дизайн валидации соответствовал стандартным практикам валидации методов Научной рабочей группы по судебной токсикологии (SWGTOX) и включал оценку чувствительности, прецизионности, специфичности, переноса, эффекта крючка, дрейфа, устойчивости/робастности и исследование образцов из реальных дел. Экспериментальный предел обнаружения клоназепама составил не менее 5,0 нг/мл в цельной крови и не менее 10,0 нг/мл в моче. Продемонстрирована отличная прецизионность при оценке среднего значения трёх повторных измерений в пяти отдельных сериях (n = 15) для пороговой концентрации, а также концентраций на 50% ниже, на 50% выше и на 100% выше пороговой. Несмотря на оптимизацию метода и исключительную прецизионность на каждом уровне, действующие требования SWGTOX к валидации достоверного порога принятия решения выполнены не были. Однако матрицы цельной крови и мочи соответствовали предлагаемой редакции требований SWGTOX к установлению достоверного порога, опубликованной Советом по стандартам Американской академии судебных наук, а метод надёжно выявлял бензодиазепины без влияния компонентов матрицы или других соединений, обычно обнаруживаемых в подлинных образцах из судебно-токсикологических дел. Результаты исследования образцов из реальных дел были сопоставимы с результатами, полученными при их первоначальном скрининге с использованием оксазепама в качестве целевой молекулы. Набор Neogen® Benzodiazepine с клоназепамом в качестве целевой молекулы продемонстрировал перекрёстную реактивность с 29 различными бензодиазепинами, а также отличную прецизионность и чувствительность при исследовании цельной крови и мочи, что делает его эффективным и надёжным методом скрининга бензодиазепинов, несмотря на несоответствие валидации действующим требованиям SWGTOX к достоверному порогу принятия решения.