Многоточечная ковалентная иммобилизация ферментов на носителях, активированных эпоксидными группами: стабилизация промышленных ферментов

Коммерческие эпоксидные носители могут быть весьма полезны для стабилизации белков посредством многосточечного ковалентного связывания, если иммобилизация спроектирована надлежащим образом. В этой главе описан протокол, позволяющий в полной мере использовать возможности носителя. Основные этапы протокола таковы: (1) ферменты гидрофобно адсорбируют на носителях при высокой ионной силе раствора; (2) между адсорбированным белком и носителем происходит «межмолекулярная» ковалентная реакция; (3) иммобилизованный белок инкубируют при щелочном pH, чтобы усилить многосточечное ковалентное связывание и тем самым стабилизировать фермент; (4) гидрофобную поверхность носителя гидрофилизируют посредством реакции оставшихся групп с аминокислотами, чтобы уменьшить неблагоприятные гидрофобные взаимодействия между ферментом и носителем. Применение этой стратегии значительно повысило стабильность пенициллин G-ацилазы по сравнению со стабильностью, достигнутой при использовании обычных протоколов.