Алисол A-24-ацетат усиливает захват глюкозы посредством активации АМФ-активируемой протеинкиназы в миотрубках C2C12

Введение: Алисол A-24-ацетат (AA-24-a) — один из основных активных тритерпенов, выделенных из широко известного лекарственного растения частухи восточной (Alisma orientale (Sam.) Juz.), которому присущи различные биологические эффекты, включая гипогликемический. Остаётся неясным, относится ли AA-24-a к соединениям частухи восточной (A. orientale (Sam.) Juz.), обладающим гипогликемической активностью. Цель настоящего исследования — изучить влияние AA-24-a на захват глюкозы миотрубками C2C12 и потенциальный механизм его действия.

Методы: Оценивали влияние AA-24-a на захват глюкозы и транслокацию GLUT4 на плазматическую мембрану. Захват глюкозы определяли с помощью теста с 2-(N-(7-нитробенз-2-окса-1,3-диазол-4-ил)амино)-2-дезоксиглюкозой (2-NBDG). Белки клеточной мембраны выделяли, а содержание транспортёра глюкозы 4 (GLUT4) определяли методом иммуноблоттинга для оценки транслокации GLUT4 на плазматическую мембрану. Для изучения лежащего в основе механизма методом иммуноблоттинга определяли уровни фосфорилирования белков, участвующих в инсулиновом сигнальном пути и пути 5'-аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы (AMPK). Кроме того, для изучения роли этих киназ в обусловленных AA-24-a захвате глюкозы и транслокации GLUT4 применяли специфические ингибиторы ключевых ферментов сигнального пути AMPK.

Результаты: AA-24-a значительно усиливал захват глюкозы и транслокацию GLUT4 в миотрубках C2C12. AA-24-a повышал фосфорилирование AMPK, но не влиял на инсулин-зависимый путь с участием субстрата 1 инсулинового рецептора (IRS1) и протеинкиназы B (PKB/AKT). Кроме того, повышалось фосфорилирование p38 митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) и субстрата AKT массой 160 кДа (AS160) — двух белков, действующих ниже AMPK в сигнальном каскаде. Ингибитор AMPK соединение C блокировал активацию пути AMPK под действием AA-24-a и устранял обусловленные AA-24-a усиление захвата глюкозы и транслокацию GLUT4 на плазматическую мембрану, что указывает на стимуляцию AA-24-a метаболизма глюкозы через путь AMPK in vitro. Ингибитор кальций-кальмодулин-зависимой протеинкиназы-киназы β (CaMKKβ) STO-609 также ослаблял обусловленные AA-24-a захват глюкозы и транслокацию GLUT4. Кроме того, STO-609 снижал обусловленное AA-24-a фосфорилирование AMPK, p38 MAPK и AS160.

Выводы: Эти результаты свидетельствуют о том, что AA-24-a, выделенный из частухи восточной (A. orientale (Sam.) Juz.), значительно усиливает захват глюкозы посредством сигнального пути CaMKKβ–AMPK–p38 MAPK/AS160.