Фенольный экстракт листьев Moringa oleifera индуцирует каспазозависимый и каспазонезависимый апоптоз клеток меланомы человека посредством образования активных форм кислорода и активации внутреннего митохондриального пути

Moringa oleifera Lam. издавна применяют для лечения различных заболеваний, включая сахарный диабет, возрастные изменения, воспалительные заболевания и рак. Во многих исследованиях показано, что неочищенный экстракт листьев Moringa oleifera обладает противоопухолевой активностью. Поэтому в настоящем исследовании экстракт листьев фракционировали с использованием различных растворителей, чтобы определить фракцию с наиболее выраженным антипролиферативным действием на клетки меланомы. Были приготовлены метанольный экстракт (MO-ME), гексановая (MO-HE), хлороформная (MO-CH), этилацетатная (MO-EA) и водорастворимая (MO-WA) фракции листьев. Определяли общее содержание фенольных соединений и флавоноидов. Антипролиферативную активность в отношении клеток меланомы и нормальных клеток оценивали с помощью теста WST-1. Апоптотическую активность оценивали по конденсации хроматина, фрагментации ДНК и экспозиции фосфатидилсерина на внешней поверхности клеточной мембраны. Для уточнения лежащих в основе молекулярных механизмов исследовали экспрессию генов, связанных с апоптозом, деполяризацию митохондрий и образование активных форм кислорода. MO-ME, MO-EA и MO-CH подавляли пролиферацию клеток меланомы человека A375 и A2058, оказывая лишь незначительное воздействие на нормальные фибробласты кожи человека WS1 и первичные нормальные фибробласты дермы человека (NHDF). Среди исследованных фракций богатая фенольными соединениями MO-EA значительно подавляла рост клеток A375 дозо- и времязависимым образом. Антипролиферативное действие, вероятно, было обусловлено апоптозом, о чём свидетельствовало значимое усиление конденсации хроматина, фрагментации ДНК и экспозиции фосфатидилсерина. Апоптоз стимулировался усилением образования активных форм кислорода и снижением мембранного потенциала митохондрий. MO-EA активировала Bax и одновременно снижала экспрессию Bcl-2, что приводило к увеличению соотношения Bax/Bcl-2. Механизмы гибели клеток включали активацию каспаз-3/7 и -9 (каспазозависимый путь), а также активацию и транслокацию фактора, индуцирующего апоптоз (AIF), в ядро (каспазонезависимый путь). Полученные данные свидетельствуют о выраженном противоопухолевом действии богатой фенольными соединениями фракции листьев Moringa oleifera на клетки меланомы, реализующемся посредством каспазозависимого и каспазонезависимого апоптоза, опосредованного митохондриальными активными формами кислорода. Эти результаты создают основу для изучения возможности эффективного лечения рака кожи с использованием богатой фенольными соединениями фракции листьев Moringa oleifera.