Кверцетин индуцирует аутофагию, способствующую апоптозу, через сигнальный путь SIRT1/AMPK в клеточных линиях рака лёгкого человека A549 и H1299 in vitro

Введение: Кверцетин — природное флавоноидное соединение, широко представленное во фруктах и овощах, — обладает выраженным противоопухолевым действием. Ранее было показано, что он подавляет рост и индуцирует апоптоз клеток рака лёгкого человека A549 и H1299. Однако влияние кверцетин-индуцированной аутофагии на апоптоз и возможный механизм аутофагии в клетках A549 и H1299 до настоящего времени подробно не изучались.

Методы: Клетки A549 и H1299 инкубировали с различными концентрациями кверцетина в течение 24 часов. Рост клеток оценивали с помощью набора для подсчёта клеток CCK-8, а апоптоз — методом вестерн-блоттинга с определением белков, участвующих в апоптозе. Уровни белков и генов, связанных с аутофагией, определяли методом вестерн-блоттинга и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) соответственно. Аутофагосомы также исследовали с помощью трансмиссионной электронной микроскопии и иммунофлуоресцентного окрашивания LC3.

Результаты: Кверцетин дозозависимо снижал жизнеспособность клеток и индуцировал митохондриально-зависимый апоптоз в клетках A549 и H1299. Кроме того, кверцетин повышал экспрессию LC3-II и beclin 1 и снижал экспрессию p62. Под воздействием кверцетина повышались уровни мРНК LC3-II, beclin 1, Atg5, Atg7 и Atg12. Ингибирование аутофагии с помощью 3-метиладенина эффективно подавляло кверцетин-индуцированный апоптоз. Кроме того, кверцетин дозозависимо повышал уровень белка SIRT1 и соотношение pAMPK/AMPK. Кверцетин-индуцированная аутофагия ослаблялась под действием ингибитора SIRT1 EX527 и при снижении экспрессии SIRT1 с помощью малых интерферирующих РНК (миРНК).

Выводы: Кверцетин-индуцированная аутофагия способствует апоптозу клеток рака лёгкого A549 и H1299 и связана с активацией сигнального пути SIRT1/AMPK.