Перманганат калия — отличная альтернатива тетраоксиду осмия при криозамещении

Криофиксация под высоким давлением с последующим криозамещением — ценный метод ультраструктурного анализа биологических образцов, залитых в смолу. Визуализация липидных мембран — один из важнейших аспектов любого ультраструктурного исследования; в образцах, криофиксированных под высоким давлением, она может быть особенно сложной. Исторически для фиксации и контрастирования структур, содержащих липиды, в растворах для криозамещения предпочтительно использовали тетраоксид осмия. Однако тетраоксид осмия не только редок и дорог, но также летуч и токсичен. В этой работе мы предлагаем использовать при криозамещении сочетание перманганата калия, ацетата уранила и воды в ацетоне в качестве дополнительных реагентов. Эта смесь обеспечивает интенсивное объёмное контрастирование клеточной ультраструктуры и мембран, поэтому последующее контрастирование не требуется; метод также хорошо подходит для визуализации поверхности блока. Таким образом, перманганат калия позволяет эффективно заменить тетраоксид осмия в растворе для криозамещения без ухудшения качества сохранения ультраструктуры.