Функциональный анализ промотора китайского изолята вируса полосатости жилок земляники

Введение: Промоторы — важные факторы, влияющие на экспрессию генов в клетках. Активность вирусных промоторов обычно оценивают, чтобы отобрать подходящие для получения трансгенных растений, научных исследований и биотехнологических применений. В этой работе клонировали полноразмерный промотор китайского изолята вируса полосатости жилок земляники (SVBV) и создали несколько вариантов с делециями, чтобы оценить их пригодность для получения репортерных белков в стабильных трансгенных растениях.

Методы: Полноразмерный промотор SVBV (SP1) и три его делеционных варианта (SP2, SP3 и SP4) амплифицировали методом полимеразной цепной реакции. Влияние SP1, SP2, SP3 и SP4 на экспрессию генов оценивали с помощью репортерных генов β-глюкуронидазы (GUS) и зелёного флуоресцентного белка (GFP).

Результаты: При анализе транзиентной экспрессии все четыре промотора обеспечивали экспрессию репортерных генов, однако её уровень существенно различался. Активность транскрипции под контролем SP1 была значительно выше, чем под контролем промотора CaMV 35S. После стабильной трансформации растений табака (Nicotiana tabacum) геном GUS экспрессия трансгена под контролем SP1 была примерно в 2,6 раза выше, чем под контролем CaMV 35S. Кроме того, совместная инокуляция растений вектором с геном GUS под контролем SP1 и вектором, экспрессирующим открытую рамку считывания (ORF) V или ORF VI вируса SVBV, повышала экспрессию GUS.

Выводы: Промотор SP1 китайского изолята SVBV обеспечивал транзиентную и стабильную экспрессию в растениях. Он был сильнее промоторов CaMV 35S и FLt-US и может быть более пригоден для получения стабильных трансгенных растений.