Метод ВЭЖХ-МС/МС для определения энантиомеров кленбутерола в тканях животных и его применение для изучения энантиоселективного распределения кленбутерола у мини-свиней породы Бама

Цель: Разработать и валидировать простой и надёжный аналитический метод разделения и определения энантиомеров кленбутерола (R-(−)-кленбутерола и S-(+)-кленбутерола) в тканях животных и применить его для изучения энантиоселективного распределения кленбутерола у мини-свиней породы Бама.

Методы: Разработан и валидирован метод ВЭЖХ-МС/МС с электроспрейной ионизацией в положительном режиме и мониторингом множественных реакций. После осаждения белков хлорной кислотой образцы подвергали лишь одной стадии пробоподготовки — жидкостной экстракции метил-трет-бутиловым эфиром в сильнощелочной среде. В качестве хирального селектора использовали тейкопланин, а в качестве подвижной фазы — 10 мМ раствор формиата аммония в метаноле. Оптимизированное хроматографическое разделение занимало 8 мин. Исследовали два хиральных изомера в 11 съедобных тканях мини-свиней породы Бама.

Результаты: R-(−)-кленбутерол и S-(+)-кленбутерол удавалось разделить до базовой линии и точно определять в диапазоне 5–500 нг/г. Значения правильности определения составляли от −11,9 до 13,0% для R-(−)-кленбутерола и от −10,2 до 13,2% для S-(+)-кленбутерола; внутри- и межсерийная прецизионность — от 0,7 до 6,1% и от 1,6 до 5,9% соответственно. Во всех съедобных тканях свиней отношение R/S было статистически значимо ниже 1.

Выводы: Метод обладает хорошей специфичностью и устойчивостью при определении R-(−)-кленбутерола и S-(+)-кленбутерола в тканях животных и может применяться для рутинного анализа в целях контроля безопасности пищевых продуктов и допинг-контроля. Отношение R/S в тканях свиней, предназначенных в пищу, существенно отличается от такового в лекарственных препаратах (рацематах с отношением R/S, равным 1), что позволяет идентифицировать источник кленбутерола при допинг-контроле и расследованиях.