Мишени бакучиола — митохондриальные белки: прогибитины и потенциалзависимые анионные каналы. Новые данные для разработки противовирусных препаратов

Ранее мы сообщали, что бакучиол — фенольное изопреноидное соединение с противоопухолевой активностью — и его аналоги подавляют вирус гриппа. Однако белки-мишени бакучиола оставались неизвестными. В этой работе мы изучили, какие структурные особенности бакучиола необходимы для противогриппозного действия, и установили, что для него необходимы все функциональные группы и хиральность атома C6. На основании этих результатов мы синтезировали молекулярный зонд с биотиновой меткой, присоединённой к атому C1 бакучиола. С помощью этого зонда провели аффинное выделение белков из лизатов клеток почки собаки Madin–Darby (MDCK), а затем выделили специфически связывающиеся с бакучиолом белки методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE). При анализе методом нано-ВЭЖХ-МС/МС в качестве белков, связывающихся с бакучиолом, были идентифицированы прогибитин 2 (PHB2), потенциалзависимые анионные каналы 1 и 2 (VDAC1 и VDAC2). Связывание бакучиола с PHB1, PHB2 и VDAC2 in vitro подтвердили методом иммуноблоттинга. Иммунофлуоресцентный анализ показал, что в клетках бакучиол связывался с прогибитинами и VDAC2 и колокализовался с ними в митохондриях. Подавление экспрессии прогибитинов или VDAC2 с помощью специфических малых интерферирующих РНК (siRNA) в сочетании с бакучиолом приводило к значительно более низкой экспрессии нуклеопротеина вируса гриппа и титру вируса в кондиционированной среде инфицированных клеток MDCK, чем при одной лишь трансфекции или обработке бакучиолом. Эти результаты показывают, что снижение уровня прогибитинов или VDAC2 в сочетании с бакучиолом аддитивно подавляет размножение вируса гриппа. Полученные данные указывают на новый механизм противогриппозного действия бакучиола, опосредованный этими митохондриальными белками, и открывают новые возможности для разработки препаратов против гриппа.