Совершенствование определения соотношений изотопов углерода эндогенных стероидов в сыворотке крови человека

В 2023 году определение концентраций тестостерона (T) и 4-андростендиона (A4) в сыворотке крови было включено в стероидный модуль Биологического паспорта спортсмена. Продольное наблюдение за концентрациями T и A4 и отношением T/A4 позволяет выявлять применение низких доз T, особенно у спортсменок, тогда как показатели мочевого стероидного профиля могут существенно не изменяться. В отличие от мочевого стероидного профиля, сведения о факторах, влияющих на концентрации T и A4 в сыворотке, пока сравнительно ограничены; поэтому желательно подтверждать экзогенное происхождение целевых аналитов с помощью масс-спектрометрии изотопных отношений (IRMS). В недавнем исследовании было показано, что соотношения изотопов углерода (CIR) сывороточных стероидов можно определять при достаточной концентрации аналитов. В исследовании использовали двумерную газовую хроматографию в сочетании с IRMS (2D-GC/IRMS), а число доступных потенциальных эндогенных референсных соединений было ограниченным. Представленный здесь подход основан на дополнительных стратегиях очистки аналитов и позволяет преодолеть ограничения прежнего метода. Для анализа стероидов в сыворотке разработали и полностью валидировали очистку методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), чтобы лаборатории допинг-контроля могли внедрить этот метод в дополнение к уже применяемым протоколам анализа стероидов в моче. Помимо ранее изученных эндогенных стероидов — холестерина, дегидроэпиандростерон сульфата, сульфата андростерона и сульфата эпиандростерона — в перечень анализируемых соединений включили еще два: сульфат прегненолона и сульфат 5-андростен-3β,17β-диола. Концентрации стероидов в сыворотке от 25 нг/мл позволяют надежно определять CIR. Для расчета популяционных пороговых значений для всех значимых сочетаний стероидов исследовали референсную выборку из 124 образцов от спортсменов и спортсменок.