Первое сообщение о пятнистости листьев частухи подорожниковой (Alisma plantago-aquatica Linn.), вызываемой Plectosphaerella alismatis, в Китае

Частуха подорожниковая (Alisma plantago-aquatica Linn.) — традиционно используемое в китайской медицине водное растение. С августа 2024 года в районе Юйчэн города Яань провинции Сычуань, Китай (29°98′ с. ш. и 102°98′ в. д.), наблюдали пятнистость листьев частухи подорожниковой; средняя распространённость заболевания на полях составляла 70–90%. Сначала на внешних листьях появлялись округлые красновато-коричневые пятна, затем более крупные пятна сливались, что приводило к пожелтению и отмиранию листьев и в конечном итоге к снижению урожая примерно на 35%. Для выделения патогенных микроорганизмов собрали 10 образцов поражённых листьев и дезинфицировали их 75%-ным этанолом в течение 30 с, затем 0,5%-ным раствором NaClO в течение 2 мин. После трёхкратного промывания стерильной водой образцы переносили на картофельно-декстрозный агар (PDA) с добавлением 50 мг/л сульфата стрептомицина и культивировали в темноте при 28 °C. Через 7 дней кончики гиф появившихся колоний переносили на свежий PDA для очистки культуры. Полученные восемь изолятов обозначили ZX1–ZX8. Сначала патогенность изолятов проверяли на отделённых листьях. На здоровые отделённые листья наносили 5-миллиметровые блоки PDA с изолятами; в качестве контроля использовали блоки чистого PDA. Через 7 дней пятна и симптомы пожелтения, сходные с наблюдавшимися в поле, появились только на листьях, инокулированных изолятом ZX6. На листьях, инокулированных другими изолятами, и на контрольных листьях симптомы отсутствовали. Затем патогенность ZX6 дополнительно проверили на целых растениях. Здоровые двухмесячные сеянцы частухи подорожниковой инокулировали суспензией конидий ZX6 (10⁶ спор/мл); в качестве контроля использовали чистую воду. Растения содержали в климатической камере при температуре 22–28 °C, относительной влажности 85%, 16-часовом освещении и 8-часовом периоде темноты. Опыт на патогенность повторили дважды. Через 7 дней на инокулированных листьях наблюдали типичные симптомы пятнистости. Патоген, повторно выделенный из поражённых листьев, имел те же морфологические признаки, что и исходный изолят ZX6, что соответствовало постулатам Коха. Это подтвердило, что изолят ZX6 является возбудителем пятнистости листьев частухи подорожниковой. Колонии ZX6 на PDA сначала были белыми и пушистыми, постепенно становились лососево-розовыми; над поверхностью среды формировалось мало воздушных гиф, поверхность была слизистой. Конидии гладкие, с 0–1 перегородкой, эллиптические или яйцевидные, размером 12,2–19,4 × 2,2–3,4 мкм (в среднем 15,5 × 2,7 мкм; n = 100). Эти морфологические признаки соответствовали признакам грибов рода Plectosphaerella (Carlucci et al., 2012; Pitt et al., 2005). Для видовой идентификации из мицелия выделили геномную ДНК и амплифицировали участки внутреннего транскрибируемого спейсера (ITS), большой субъединицы рДНК (LSU) и гена кальмодулина (CaM) с использованием праймерных пар ITS1/ITS4 (White et al., 1990), LR0R/LR5 (Hopple et al., 1999) и CL1/CL2 (Weir et al., 2012) соответственно. По данным поиска BLAST, последовательности ITS, LSU и CaM имели сходство 99,39% (492 из 495 п. н.), 100% (850 из 850 п. н.) и 100% (479 из 479 п. н.) соответственно с последовательностями штамма Plectosphaerella alismatis CBS 113362 в базе данных NCBI (номера доступа JF780523, KY662261 и KY416925 соответственно). На основании объединённых последовательностей ITS, LSU и CaM с использованием MEGA 11.0 построили филогенетическое дерево методом максимального правдоподобия. Сочетание морфологических признаков и результатов филогенетического анализа подтвердило, что изолят ZX6 относится к виду Plectosphaerella alismatis. Это первое сообщение о поражении листьев Alisma plantago-aquatica грибом Plectosphaerella alismatis в Китае. Полученные результаты будут способствовать разработке эффективных мер борьбы с пятнистостью листьев частухи подорожниковой.