Просветление миокарда методом погружения и подавление автофлуоресценции

Цель: Современные достижения оптической микроскопии и подготовки тканей позволяют получать трёхмерные изображения сложных микрососудистых сетей. Просветление тканей улучшает проникновение света и увеличивает глубину визуализации. Обычно для маркировки сосудов и просветления тканей применяют методы перфузии. Однако при обработке тканей крупных животных практичнее использовать методы с погружением образца.

Методы: Представлен протокол маркировки микрососудов и просветления ткани миокарда методом погружения с использованием лектина томата и CUBIC — коктейлей для прозрачной визуализации мозга и тела и вычислительного анализа. Протокол позволяет получать изображения на глубину до 150 мкм. Этапы удаления липидов и подавления автофлуоресценции были оптимизированы для ткани миокарда крысы и свиньи. Качество изображений оценивали с помощью автоматического анализа отношения сигнал/шум (ОСШ) и средней интенсивности сигнала в срезах по оси z.

Результаты: Наилучшее качество изображений обеспечивала 24-часовая инкубация в реагенте I CUBIC. Применение TrueVIEW, глицина и трипанового синего не оказывало значимого влияния на ОСШ. При использовании TrueBlack и Sudan Black B отмечалась тенденция к уменьшению глубины визуализации по сравнению с контролем без инкубации с гасителем автофлуоресценции. В целом значения ОСШ в ткани миокарда крысы были выше, чем в образцах ткани свиньи.

Выводы: Представленный протокол служит надёжной основой для оптимизации методов просветления ткани миокарда с погружением образца. В дальнейших исследованиях количественно оценят анатомические и топологические характеристики коронарной микрососудистой сети, чтобы сравнить патологические состояния.