Частичная аналитическая валидация микроРНК-148a и 375 для выявления поражения поджелудочной железы у здоровых собак и собак с панкреатитом

Введение: микроРНК (miRNA) были предложены в качестве биомаркеров панкреатита у собак из-за высоких пиковых концентраций и экспериментальной связи с повреждением ацинарных клеток. Однако аналитическая валидация и влияние интерферирующих веществ остаются неизвестными.

Цель: исследование было направлено на то, чтобы (i) разработать и оценить аналитическую валидность анализа miRNA-148a и miRNA-375 в сыворотке и (ii) сравнить уровни miRNA-148a и miRNA-375 у здоровых собак и собак с панкреатитом.

Методы: циркулирующие микроРНК количественно определяли в сыворотке здоровых собак (n = 40) и собак с панкреатитом (n = 40). Были установлены референсные интервалы, после чего сывороточные микроРНК сравнивали между группами. Линейность оценивали с помощью разведения и параллелизма (отношение наблюдаемого к ожидаемому, O/E). Прецизионность оценивали по коэффициентам вариации внутри- и межисследовательной серии (% CV). В качестве интерферирующих факторов исследовали интралипид, билирубин и гемоглобин.

Результаты: для miRNA-148a референсный интервал составил < 33 000 копий гена, а среднее отношение O/E — 100,4%. Средние межсерийный и внутрисерийный % CV составили 1,5% и 1,3% соответственно. Для miRNA-375 референсный интервал составил < 4 копий гена, а среднее отношение O/E — 100,1%. Средние межсерийный и внутрисерийный % CV составили 3,2% и 0,5% соответственно. Гемолиз приводил к ложному повышению результатов в обоих анализах (p = 0,003 — < 0,0001). У собак с панкреатитом уровень miRNA-148a был снижен (в среднем 192 копии гена) по сравнению со здоровыми контрольными животными (в среднем 2760 копий гена; p < 0,0001), тогда как по miRNA-375 различий между группами не было (p = 0,94).

Выводы: анализы микроРНК были аналитически валидными; однако гемолиз, который часто встречается при панкреатите, может влиять на результаты теста. У собак с панкреатитом miRNA-148a была подавлена. Неясно, является ли это причиной заболевания или его следствием.