Плазмиды pUC: система на основе M13mp7 для инсерционного мутагенеза и секвенирования с использованием синтетических универсальных праймеров

Создан ряд плазмидных векторов, содержащих участок множественного клонирования M13mp7 (MCS7). В один из этих векторов в центр симметричного MCS7 встроен маркер устойчивости к канамицину, в результате чего получен элемент мобилизации сайтов рестрикции (RSM). Маркер лекарственной устойчивости можно удалить из этого вектора с помощью любой рестриктазы, распознающей сайт во фланкирующих последовательностях RSM, получив RSM с различными липкими или тупыми концами. Эти фрагменты можно использовать для инсерционного мутагенеза любой молекулы-мишени, содержащей совместимые сайты рестрикции. Инсерционные мутанты отбирают по устойчивости к канамицину. При удалении маркера с помощью PstI можно получить небольшую вставку без сдвига рамки считывания. Кроме того, за счёт изменения симметричной структуры MCS7 созданы два новых участка множественного клонирования с единичными сайтами рестрикции. Полученные плазмиды pUC8 и pUC9 позволяют клонировать фрагменты, расщеплённые двумя рестриктазами, в обеих ориентациях относительно промотора lac. Концевые последовательности любой ДНК, клонированной в этих плазмидах, можно охарактеризовать с помощью универсальных праймеров M13.