Экспрессия CFTR и секреция хлорида в поляризованных иммортализованных клетках эпителия бронхов человека

Серьёзным ограничением при изучении направленного транспорта ионов, секреции и дифференцированных функций эпителия дыхательных путей человека было отсутствие подходящих систем культивирования клеток. Определённый прогресс был достигнут благодаря трансформации первичных культур эпителиальных клеток. Однако при многократных пересевах трансформированные клетки обычно утрачивают дифференцированные свойства, особенно после кризиса. Описано создание линии эпителиальных клеток 16HBE14o−, полученной из эпителия бронхов человека и трансформированной большим T-антигеном SV40 после кризиса. Эта линия сохраняет дифференцированную морфологию и функции эпителия. В культурах клеток обнаруживаются плотные контакты и реснички; монослои формируют трансэпителиальное электрическое сопротивление, измеренное в камерах Уссинга, и сохраняют способность к β-адренергической стимуляции транспорта хлорид-ионов, зависимого от цАМФ. Транспорт измеряли по выходу 36Cl− из клеток или по току короткого замыкания в камерах Уссинга. Клетки также усиливают транспорт хлорида в ответ на брадикинин или кальциевый ионофор. Кроме того, в клетках 16HBE14o− методом Нозерн-блоттинга выявляется мРНК, а методом Вестерн-блоттинга — белок трансмембранного регулятора проводимости при муковисцидозе (CFTR). Эта линия представляет собой ценный инструмент для изучения регуляции CFTR и его роли в контроле транспорта хлорид-ионов в эпителии дыхательных путей человека, а также других аспектов биологии клеток дыхательных путей человека.