Жёсткая регуляция, модуляция и высокий уровень экспрессии с помощью векторов, содержащих промотор PBAD арабинозного оперона

Мы сконструировали серию плазмидных векторов (векторы pBAD), содержащих промотор PBAD оперона araBAD (арабинозного оперона) и ген, кодирующий положительный и отрицательный регулятор этого промотора, araC. Используя ген phoA и фьюжны с phoA для контроля экспрессии в этих векторах, мы показали, что отношение индукции к репрессии может достигать 1200-кратного значения по сравнению с 50-кратным для векторов на основе PTAC. Экспрессию phoA можно модулировать в широком диапазоне концентраций индуктора (арабинозы), а присутствие глюкозы, подавляющей экспрессию, снижает её до чрезвычайно низкого уровня. Кроме того, кинетика индукции и репрессии очень быстрая и значительно зависит от аллеля ara у штамма-хозяина. Таким образом, использование этой системы, которую можно эффективно и быстро включать и выключать, позволяет простым способом, без изменения температуры, изучать важные аспекты бактериальной физиологии. Мы использовали жёсткую регуляцию промотора PBAD для изучения фенотипов нулевых мутаций в эссенциальных генах и исследовали возможность применения векторов pBAD как системы экспрессии.