ARPE-19 — линия клеток пигментного эпителия сетчатки человека с признаками дифференцировки

Пигментный эпителий сетчатки (ПЭС) играет ключевую роль в развитии и поддержании прилежащих фоторецепторов сетчатки позвоночных. В этом исследовании описаны получение и характеристика ARPE-19 — спонтанно возникшей линии клеток ПЭС человека с нормальным кариотипом, формирующей поляризованные монослои эпителиальных клеток на пористых фильтрах. Клеточную линию получили путем селективной трипсинизации первичной культуры ПЭС, что позволило выделить однородную популяцию клеток с выраженным эпителиальным фенотипом и высоким пролиферативным потенциалом. Для оценки степени биохимической дифференцировки методом нозерн-анализа исследовали экспрессию специфических для ПЭС маркеров CRALBP и RPE65. В образцах общей мРНК ARPE-19 выявляли единственный транскрипт мРНК CRALBP размером 1,6 кб и единственный транскрипт RPE65 размером 2,8 кб. Экспрессию белка CRALBP в лизате клеток ARPE-19 выявляли методом вестерн-блоттинга, а с помощью иммунноцитохимии обнаруживали CRALBP во всей цитоплазме большинства, но не всех клеток в конфлюэнтных культурах. Экспериментально определяли необходимые условия формирования монослоя и установили, что клетки ARPE-19 приобретают морфологическую поляризацию при выращивании на фильтрах Transwell-COL, покрытых ламинином, в среде с низким содержанием сыворотки. Динамику формирования плотных контактов оценивали путем измерения трансэпителиального сопротивления монослоев; через 4 недели культивирования оно достигало максимальных значений 50–100 Ом·см². Барьерные свойства монослоев ARPE-19 оценивали по переносу 3H-инсулина из апикального в базолатеральный компартмент камер для культивирования клеток. Наконец, методом серийного разведения получали клональные субклеточные линии, пытаясь создать сублинию с высоким трансэпителиальным сопротивлением. Морфология субклеточных линий различалась, а клонированные клетки проявляли склонность к старению в культуре, что подтверждает нетрансформированный характер этой клеточной линии. Ни один из монослоев субклеточных линий не продемонстрировал трансэпителиального сопротивления выше, чем у исходных клеток. Полученные результаты показывают, что ARPE-19 обладает структурными и функциональными свойствами, характерными для ПЭС in vivo, и позволяет предположить, что эта клеточная линия будет ценна для in vitro-исследований физиологии пигментного эпителия сетчатки.