Мутанты Vibrio cholerae O1 с нарушенной подвижностью характеризуются сниженной адгезией in vitro к эпителиальным клеткам тонкой кишки человека по данным ИФА

Для развития диарейного заболевания Vibrio cholerae должен колонизировать тонкую кишку человека. Штаммы V. cholerae N16961 (биотип Эль-Тор, серовар Инаба) и 395 (классический биотип, серовар Огава) адгезировали к поверхности эпителиальных клеток и слизистому слою изолированных эпителиальных клеток тонкой кишки человека. На тонких срезах тонкой кишки они специфически связывались со слизистой оболочкой и апикальной мембраной. При световой и непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии связывания с базолатеральной мембраной диссекционно выделенной эпителиальной ткани или внутриклеточными компонентами эпителиальных клеток не выявлено. На основании этих результатов был разработан модифицированный ИФА для количественной оценки адгезии V. cholerae к эпителиальным клеткам тонкой кишки человека. В качестве субстрата для связывания использовали гомогенизированную ткань слизистой оболочки тонкой кишки человека. Обработка гомогената эпителиальных клеток 2-меркаптоэтанолом, нарушающая вторичную структуру белков и гликопротеинов, ингибировала связывание штаммов V. cholerae, что указывает на связывание со специфическими рецепторами. В модифицированном ИФА исследовали адгезию нескольких штаммов и мутантов V. cholerae обоих биотипов. Дикие штаммы обоих биотипов, а также нетоксигенные штаммы, ранее известные способностью колонизировать организм человека, адгезировали к субстрату. Мутанты V. cholerae с нарушениями подвижности, строения жгутика или хемотаксиса, для которых ранее была показана сниженная колонизация в моделях на животных, характеризовались сниженной адгезией. Специфичность этого метода и возможность количественной оценки связывания должны облегчить выявление и изучение факторов адгезии, участвующих в колонизации эпителиальных клеток тонкой кишки человека V. cholerae.