Метод микроядер in vitro

Изучение повреждений ДНК на уровне хромосом — важная часть генетической токсикологии, поскольку хромосомные мутации играют существенную роль в канцерогенезе. Микроядерные тесты стали одним из предпочтительных методов оценки повреждения хромосом, поскольку позволяют надёжно выявлять как потерю хромосом, так и их разрывы. Поскольку микроядра могут выявляться только в клетках, завершивших деление ядра, был разработан специальный метод идентификации таких клеток по двуядерному строению после блокирования цитокинеза цитохалазином B (Cyt-B) — ингибитором сборки микрофиламентов. Тест микроядер с блокадой цитокинеза (CBMN) обеспечивает более высокую точность, поскольку полученные данные не искажаются изменением кинетики клеточного деления вследствие цитотоксичности исследуемых веществ или неоптимальных условий культивирования клеток. В настоящее время этот метод применяют на различных типах клеток для мониторинга генетических повреждений в популяции, скрининга химических веществ на генотоксический потенциал, а также для решения специальных задач, таких как прогнозирование радиочувствительности опухолей и межиндивидуальных различий радиочувствительности. В базовой современной форме тест CBMN с использованием простых морфологических критериев позволяет оценивать следующие показатели генотоксичности и цитотоксичности: разрывы хромосом, потерю хромосом, хромосомные перестройки (нуклеоплазматические мостики), ингибирование клеточного деления, некроз и апоптоз. Модификация теста CBMN с применением цитозин-арабинозида позволяет оценивать повреждения, устранимые эксцизионной репарацией. Использование молекулярных зондов позволяет отличать потерю хромосом от их разрывов и, что особенно важно, эффективно выявлять нерасхождение хромосом в двуядерных клетках без микроядер. Таким образом, метод CBMN in vitro обеспечивает получение множества взаимодополняющих показателей генотоксичности и цитотоксичности в рамках одной системы и при относительно небольших затратах. В статье описаны основные принципы и методика проведения теста CBMN, включая подробные критерии оценки всех показателей генотоксичности и цитотоксичности, а также обозначены направления его дальнейшего развития.