Количественное определение мРНК методом ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени: тенденции и проблемы

Флуоресцентная ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени широко применяется для количественной оценки стационарных уровней мРНК и служит важным инструментом фундаментальных исследований, молекулярной медицины и биотехнологии. Методики просты в выполнении, позволяют проводить анализы с высокой пропускной способностью и сочетают высокую чувствительность с надёжной специфичностью. Технология быстро развивается благодаря появлению новых ферментов, химических систем и оборудования. Однако, хотя ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени позволяет преодолеть многие недостатки обычной ПЦР с обратной транскрипцией, становится всё очевиднее, что она создаёт новые проблемы, требующие срочного решения. Поэтому этот обзор не только отражает современное состояние метода, но и критически рассматривает проблемы интерпретации численных результатов, поддающихся статистическому анализу, точность которых при этом существенно зависит от вариабельности реагентов и действий оператора.