Одновременное определение 15 цитокинов человека в одном образце стимулированных мононуклеарных клеток периферической крови

Цитокины, секретируемые клетками иммунной системы, могут изменять поведение и свойства иммунных и других клеток. В очаге воспаления цитокины действуют на иммунные клетки совместно, и их суммарный эффект зачастую важнее функции отдельного цитокина. Для стандартных методов, например иммуноферментного анализа, обычно требуется большое количество клеток, чтобы охарактеризовать полный профиль цитокинов активированных лимфоцитов. Система Bio-Plex компании Bio-Rad Laboratories сочетает принцип сэндвич-иммуноанализа с технологией флуоресцентных микросфер Luminex. Мы разработали мультиплексный анализ для одновременного определения различных цитокинов в культуральном супернатанте мононуклеарных клеток периферической крови человека, стимулированных антигеном или митогеном. Анализ валидировали для 15 цитокинов человека: интерлейкина 1α (IL-1α), IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, интерферона γ и фактора некроза опухоли α — на образцах здоровых людей, пациентов с ревматоидным артритом и пациентов с ювенильным идиопатическим артритом. При сравнении мультиплексного анализа со стандартным иммуноферментным анализом на образцах этих групп коэффициенты корреляции для всех цитокинов составили от 0,75 до 0,99. Внутрисерийная вариабельность составила менее 10%, межсерийная — от 10 до 22%. Мультиплексная система показала себя эффективным инструментом количественного определения цитокинов. Она позволит полнее оценивать различия между профилями цитокинов активированных лимфоцитов у здоровых людей и пациентов с хроническими воспалительными заболеваниями.