Цитотоксическое действие комбинации рибофлавина и УФ-А на эндотелий роговицы in vitro

Недавно мы разработали метод кросслинкинга коллагена с помощью сочетанного воздействия рибофлавина и УФ-А, повышающий биомеханическую жёсткость роговицы и применяемый для лечения прогрессирующего кератоконуса. В настоящем исследовании безопасности оценивали возможное цитотоксическое действие такого воздействия на эндотелий роговицы in vitro. Культуры эндотелиальных клеток из роговиц свиней обрабатывали раствором рибофлавина концентрацией 500 мкмоль/л, затем в течение 30 мин облучали УФ-А с длиной волны 370 нм при различной облучённости эндотелия — от 0,1 до 1,6 мВт/см². Через 24 ч клетки исследовали с помощью окрашивания трипановым синим и флуоресцентного окрашивания YO-PRO. Также отдельно оценивали действие каждого воздействия: УФ-А при облучённости от 0,2 до 6 мВт/см² и рибофлавина. После сочетанного воздействия рибофлавина и УФ-А резкий порог цитотоксического эффекта выявлен при облучённости 0,35 мВт/см², а при облучении только УФ-А — при 4 мВт/см². Рибофлавин сам по себе не оказывал токсического действия. При толщине роговицы менее 400 мкм сочетанное воздействие рибофлавина и УФ-А может быть цитотоксичным для эндотелиальных клеток. Поэтому перед процедурой необходимо регулярно проводить пахиметрию, чтобы исключить пациентов из группы риска.