Простой метод количественной оценки апоптоза в 96-луночных планшетах

Введение: Анализ апоптоза — неотъемлемая часть многих биологических исследований. Однако существующие методы его количественной оценки имеют ряд ограничений: они могут включать несколько этапов, повреждающих клетки, не позволяют одновременно оценивать живые, некротические и апоптотические клетки, а также могут давать неспецифичные результаты (ложноположительные сигналы). Чтобы устранить недостатки существующих методов оценки апоптоза in vitro и использовать преимущества 96-луночных планшетов, мы разработали модифицированный метод окрашивания бромидом этидия и акридиновым оранжевым (EB/AO), который можно полностью выполнить в 96-луночном планшете. Метод сочетает преимущества такого формата с возможностями традиционного окрашивания EB/AO для количественной оценки апоптоза.

Результаты: Мы сравнили новый и традиционный методы окрашивания EB/AO при оценке апоптоза суспензионных клеток (Jurkat) и прикрепленных клеток (A375) в нормальных условиях роста и при индукции апоптоза. Новый метод дал результаты, сопоставимые с результатами традиционного метода для обоих типов клеток.

Выводы: Исключение этапов отделения клеток от поверхности и отмывки значительно сокращает время выполнения анализа, уменьшает повреждение прикрепленных клеток и снижает риск потери плавающих клеток. В целом метод представляет собой усовершенствование существующих подходов, особенно при работе с прикрепленными клетками.