Современные стратегии использования аффинных меток и их удаления при очистке рекомбинантных белков

Аффинные метки представляют собой высокоэффективный инструмент очистки белков. Они позволяют очищать практически любой белок без предварительных сведений о его биохимических свойствах. Поэтому аффинные метки широко применяются в различных областях исследований, например при проведении высокопроизводительных исследований экспрессии, направленных на установление биологической функции большого числа пока не охарактеризованных белков. В ряде случаев присутствие аффинной метки в рекомбинантном белке нежелательно или может быть недостатком для предполагаемого применения белка, например в клинических целях. Поэтому в настоящее время разработано всё больше методов удаления аффинной метки из рекомбинантного белка. В большинстве из них используются рекомбинантные эндопротеазы, распознающие специфическую последовательность. Эти ферменты затем удаляют из технологического процесса методом аффинной очистки, поскольку сами они также содержат метку. В настоящем обзоре представлены наиболее распространённые аффинные метки и современные методы их удаления; особое внимание уделено удалению N-концевых гистидиновых меток с помощью TAGZyme — системы, основанной на расщеплении экзопептидазой. В связи с необходимостью снизить значительные затраты на крупномасштабную очистку белков обсуждаются также важные аспекты разработки процессов последующей очистки при производстве фармацевтических белков, включающих этап удаления метки. Кроме того, приведены сравнение выхода при стандартной и аффинной очистке и пример удаления метки с помощью TAGZyme.